原代培养的细胞原代培养

1. 原代培养的细胞原代培养

一、原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。二、仪器、材料及试剂仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）材料：胎鼠或新生鼠试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒三、操作步骤（一）胰酶消化法1.器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2-3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取组织，置平皿中。2.用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。3.用手术剪将组织剪成小块（1mm3），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。4.视组织块量加入5-6倍体积的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。5.加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。6.静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。7.1000rpm，离心10分钟，弃上清液。8.加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。9.加入培养液1-2ml（视细胞量），血球计数板计数。10.将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。（二）组织块直接培养法自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。于37℃静置3—5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。四、注意事项1、自取材开始，保持所有组织细胞处于无菌条件。细胞计数可在有菌环境中进行。2、在超净台中，组织细胞、培养液等不能暴露过久，以免溶液蒸发。3、凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮塞，以防止细菌落入。五、无菌操作的几个注意事项1、操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。2、点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。3、操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。4、不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。5、瓶子开口后要尽量保持45°斜位。6、吸溶液的吸管等不能混用。附：Hank’s液配方：KH2PO4 0.06g，Nacl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml注：Hank’s液可以高压灭菌。4℃下保存。

2. 如何进行细胞原代培养

如何进行细胞原代培养
细胞原代培养和传代培养的区别
原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
细胞株(cell strain) 是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。

3. 原代细胞和传代细胞培养有哪些区别

区别一：定义不同
原代细胞培养：原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养，也叫初代培养。
传代细胞培养：传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
区别二：特点不同
原代细胞培养：与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。
传代细胞培养：当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
区别三：生存率不同
原代细胞培养：过程相对复杂，培养条件要求也更高。
传代细胞培养：一般普通培养条件下都容易生存，传代细胞容易增殖。

区别四：原理不同
原代细胞培养：将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
传代细胞培养：当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
参考资料1：百度百科词条-原代培养
参考资料2：百度百科词条-传代培养

4. 原代细胞和传代细胞培养有哪些区别

原代细胞和传代细胞培养有含义、培养过程、培养结果和应用四个方面区别：
1、含义不同
原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。原代培养是将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。有几方面含义：原代培养中的代并非细胞的代数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经产生多代子细胞。
传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。
2、培养过程不同
原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种、加培养液、置培养条件下培养等步骤，在所有的操作过程中，都必须保持培养物及生长环境的无菌。
传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。取出长成单层的原代培养细胞，倒掉瓶内培养液，加入消化液。细胞变圆，相互之间不再连片时将消化液倒掉，加入新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。 

3、培养结果不同
原代培养细胞会分裂。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。细胞接种后一般几小时内就能贴壁，并开始生长，如接种的细胞密度适宜，5天到一周即可形成单层。
传代培养一般传到40到50代。一般情况，传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2到4天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。
4、应用不同
原代细胞培养为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段，同时也为以后传代培养创造条件。利用此方法还可直接服务于临床实践。例如，用从手术中切除的肿瘤细胞进行原代培养，然后用该培养细胞进行抗癌药物的筛选，来帮助选择最有效的化疗方案。
传代培养主要应用在医学领域，如口腔医学领域重新构建结构复杂的牙根，还有改良羊水细胞培养技术，可多次获得有效地细胞克隆，大大提高培养成功率，增加了可分析核型数量，提高了产前诊断工作的质量和效益。
参考资料来源：百度百科-原代培养
参考资料来源：百度百科-传代培养

5. 原代细胞和传代细胞培养有哪些区别?

一、概念不同
1、原代细胞：指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。
2、传代细胞：适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。
二、来源不同
1、原代细胞：指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。
2、传代细胞：幼年动物的肾、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉与肿瘤等组织的细胞。


三、培养步骤不同
1、原代细胞：将动物组织从机体中取出离散成单个细胞(常用胰蛋白酶)，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
2、传代细胞：原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞，它与原代细胞具有相同核型。这类细胞在体外可以无限制分裂。
参考资料来源：百度百科-传代细胞
参考资料来源：百度百科-原代细胞

6. 原代细胞培养实验原理步骤哪里有？

原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培 养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。

操作步骤 
（一）胰酶消化法 
1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带 入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。 
2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
 3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。 
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
 5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。 
6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
 7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。 
8、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。 
9、加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
 10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。 上述消化分离的方法是最基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如 胶原酶，透明质酶等）。
 （二）组织块直接培养法 自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时，轻 轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。

7. 原代细胞和传代细胞培养有什么区别

一、定义不同：
1、原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养，也叫初代培养。
2、传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
二、特点不同：
1、原代细胞培养与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。
2、当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
三、生存率不同：
1、原代细胞培养过程相对复杂，培养条件要求也更高。
2、传代细胞培养一般普通培养条件下都容易生存，传代细胞容易增殖。

扩展资料：
1、原代细胞培养是将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
2、传代细胞培养是当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。
3、传代培养可获得大量细胞供实验所需。传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
参考资料：百度百科-原代培养
参考资料：百度百科-传代培养

8. 原代细胞和传代细胞培养有哪些区别

由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。
体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。
    细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。
参考http://www.bioon.com/experiment/cellular11/86118.shtml